上海登寧帶您了解超濾離心管常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法

發(fā)布日期：2023-02-17      瀏覽次數(shù)：3493

超濾離心管是實(shí)驗(yàn)中用到的器皿，使用過(guò)程中經(jīng)常會(huì)遇到一些問(wèn)題，上海登寧總結(jié)了以下常遇到的問(wèn)題及其解決方法，我們一起去看下吧！










離心管是一個(gè)簡(jiǎn)單的可以承受高轉(zhuǎn)速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉淀。超濾離心管會(huì)有一個(gè)類(lèi)似于內(nèi)管和外管的兩個(gè)部分,內(nèi)管中是帶有一定分子量的膜,當(dāng)高速離心時(shí),分子量比它小的就漏到下面的管子（即外管）中了,分子量比它大的就截留在上面（即內(nèi)管中）,就是超濾的原理.常用于濃縮樣品。




超濾離心管的分子量選擇：




按照樣品量和目標(biāo)分子量選擇適當(dāng)?shù)某瑸V離心管，為了得到zui高的收率，所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右，不超過(guò)目標(biāo)分子量的一半。因?yàn)槌瑸V膜上孔徑是平均孔徑，膜上的孔并非均勻，離心高壓下也可能滲漏，因此截留孔徑越小，流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大，可選擇較小容積的超濾管多次重復(fù)加樣離心。如果同時(shí)需要脫鹽和去除可溶小分子雜質(zhì)，可將待濃縮樣品稀釋到超濾管zui大容積再離心，重復(fù)2次可除去99%鹽。避免過(guò)長(zhǎng)時(shí)間或者過(guò)速離心，雖然高品質(zhì)的產(chǎn)品都有防死端設(shè)計(jì)，可避免過(guò)度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過(guò)度濃縮，zui終體積越小，越容易因表面吸附而損失得率。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液，必要時(shí)補(bǔ)加一定體積的緩沖液沖洗膜表面，有助于減少膜表面吸附，能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面。




超濾離心管是否要預(yù)處理：




超濾離心管通常不需要預(yù)處理即可使用，不過(guò)對(duì)于蛋白質(zhì)樣本處理，特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來(lái)說(shuō)(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附zui小化，但是,某些蛋白,特別是稀的時(shí)候,會(huì)有問(wèn)題。非特異結(jié)合的程度隨著個(gè)別蛋白結(jié)構(gòu)的不同而不同。含有帶電的或者疏水結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)更易于不可逆結(jié)合到不同表面。對(duì)超濾離心管表面做鈍化預(yù)處理可降低蛋白質(zhì)在膜表面的吸附性損失，大多數(shù)情況下，在濃縮稀蛋白溶液之前預(yù)處理柱子可以提高回收率，因?yàn)槿芤嚎商顫M(mǎn)膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點(diǎn)。鈍化的方法是預(yù)先用zui高容積的鈍化溶液預(yù)浸泡柱子1小時(shí)以上，蒸餾水沖洗柱子，再用蒸餾水離心一次除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了。如果要留待以后使用，需要加無(wú)菌蒸餾水保持膜濕潤(rùn)。




常用的鈍化溶液可選擇：




1、1％牛血清白蛋白磷酸緩沖液溶液




2、5％十二烷基磺酸鈉蒸餾水水溶液




3、5％Tween-20非離子活性劑蒸餾水溶液




4、5％Triton-X 蒸餾水溶液




5、5％聚乙二醇化合物蒸餾水溶液




6、1％免疫球蛋白IgG磷酸緩沖液溶液




超濾離心管因?yàn)樾枰咚匐x心，某些對(duì)剪切力或壓力誘導(dǎo)下易變性的不穩(wěn)定樣品可能不太適合。另外超濾膜上孔徑是平均孔徑，膜容易堵，對(duì)于有微小顆?；蛘咚槠臉悠罚?/span>先用較大孔徑的超濾管過(guò)濾一次，再進(jìn)行下一步濃縮。




超濾離心管是否可以重復(fù)使用：




離心超濾管通常不能消毒再次性使用。由于單管價(jià)格并不便宜，不少人嘗試重復(fù)使用----經(jīng)驗(yàn)是用蒸餾水清洗膜表面多次，離心一次到兩次，那種可以反向離心的小管子可以加蒸餾水浸泡后反向多離心一次，會(huì)好些?？芍貜?fù)用于同一樣品，不用時(shí)可用蒸餾水浸泡，但是要防止細(xì)菌污染。不同樣品就不要混用了。有人說(shuō)泡在20%酒精、1N的NaOH（氫氧化鈉）中，防止長(zhǎng)菌，而且防干，只要超濾膜侵了水，就不可以再讓它干，但也有人說(shuō)會(huì)破壞膜結(jié)構(gòu)。反正廠家一般不支持重復(fù)用。多次重復(fù)使用會(huì)堵塞濾膜上的孔徑，甚至出現(xiàn)漏液現(xiàn)象，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。




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